Contrôle sérologique annuel destiné à détecter les anticorps de la maladie de Newcastle chez les volailles des troupeaux de reproduction dans les États membres ou les régions des États membres possédant un statut de non-vaccination 1. Prélèvement d'échantillons de sang
Des échantillons sont prélevés chaque année sur tous les troupeaux de reproduction selon la procédure suivante:
les échantillons de sang doivent être prélevés sur au moins 60 oiseaux choisis au hasard et soumis au test HI (test d'inhibition de l'hémagglutination) décrit au point 2 ci-dessous.
2. Méthode
a) Distribuer 0,025 millilitre de PBS dans tous les puits d'une microplaque plastique (puits à fond en V).
b) Verser 0,025 millilitre de sérum dans le premier puits de la plaque.
c) Utiliser un microdilueur pour réaliser les dilutions doubles de sérum de puits en puits.
d) Ajouter 0,025 millilitre de liquide allantoïdien dilué contenant 4 ou 8 unités hémagglutinantes.
e) Mélanger en tapotant doucement et laisser reposer la plaque à 4 °C pendant un minimum de 60 minutes ou à la température ambiante pendant un minimum de 30 minutes.
f) Ajouter 0,025 millilitre d'hématies à 1 % dans tous les puits.
g) Mélanger en tapotant doucement et laisser reposer à 4 °C.
h) Lire les plaques après 30 à 40 minutes lorsque la sédimentation des hématies témoins est terminée. Lire en inclinant la plaque pour observer la présence ou l'absence d'un flux en forme de larme s'écoulant au même rythme que les puits témoins contenant des hématies (0,025 millilitre) et du PBS (0,05 millilitre) uniquement.
i) Le titre HI correspond à la dilution la plus élevée d'antisérum entraînant une inhibition complète de 4 à 8 unités du virus (le titrage du HA pour confirmer la présence du nombre requis d'unités hémagglutinantes doit être inclus pour chaque test HI).
j) La validité des résultats dépend de l'obtention d'un titre inférieur à 23 pour 4 unités hémagglutinantes ou 22 pour 8 unités hémagglutinantes avec le sérum témoin négatif et d'un titre d'une dilution immédiatement supérieure ou immédiatement inférieure au titre connu du sérum témoin positif.
3. Interprétation des tests
L'antigène utilisé a une incidence sur le niveau auquel un sérum est considéré comme positif (un titre d'au moins 24 pour quatre unités hémagglutinantes et d'au moins 23 pour huit unités hémagglutinantes).