Le protocole pour l’évaluation de la résistance d’une variété comprend les étapes suivantes:
1) un minimum de 40 tubercules ou fragments comportant un œil de chaque variété du végétal spécifié sont analysés. Ils sont divisés en deux groupes (échantillons);
2) la durée du test est généralement de deux ans. Ce n’est que dans le cas où une variété se révèle extrêmement sensible à un pathotype de l’organisme nuisible spécifié que la durée du test peut être réduite à un an;
3) avant le début d’une période de test, la pureté de l’inoculum est testée selon les méthodes décrites à l’annexe I.
4) un témoin positif, sous la forme d’une variété du végétal spécifié, qui est extrêmement sensible au pathotype de l’organisme nuisible spécifié à tester, est toujours inclus dans le test;
5) l’une des méthodes d’analyse suivantes est utilisée:
i) la méthode de Glynne-Lemmerzahl (Glynne 1925, Lemmerzahl 1930, Noble & Glynne 1970);
ii) la méthode de Spieckermann (Spieckermann & Kothoff 1924); ou
iii) la méthode du SASA (Science and Advice for Scottish Agriculture – Institut de science et de conseil pour l’agriculture écossaise), qui se compose des étapes suivantes:
— préparation du tubercule:
les tubercules sont retirés de l’entrepôt frigorifique environ 10 jours avant l’inoculation prévue, rincés en douceur, séchés et stockés dans l’obscurité à température ambiante pour provoquer la germination.
Une variété très sensible («Morene» ou une variété présentant une sensibilité comparable) est incluse dans chaque inoculation pour servir de témoin positif;
— germination des spores dormantes:
les conditions pour provoquer la germination des spores dormantes sont fixées 21 jours avant l’inoculation.
Environ 10 mg de spores extraites sont ajoutés à la surface de 10 ml d’eau distillée stérile dans des petites boîtes de Petri en plastique et incubés dans l’obscurité à 20 °C jusqu’à la germination.
Le contenu de chaque boîte de Petri est dilué dans 10 ml d’eau distillée stérile supplémentaire pour l’inoculation;
— inoculation et incubation des germes:
lorsque les germes atteignent une longueur de 1 mm, de la vaseline fondue est disposée en cercle autour d’eux. Les cercles de vaseline doivent être continus pour retenir la suspension de spores sans qu’il y ait de fuite et suffisamment élevés pour que la suspension recouvre les germes.
Un seul germe ou un seul groupe de germes est entouré de vaseline sur chaque tubercule.
Les tubercules sont placés dans des boîtes en plastique, tapissées de papier absorbant humide, les germes entourés de vaseline étant orientés vers le haut.
Les cercles de vaseline sont remplis d’une suspension de spores à l’aide d’une pipette ou d’un flacon souple jusqu’à ce que les germes soient complètement immergés.
Les boîtes en plastique sont recouvertes de couvercles et incubées pendant 4 jours à une température de 10 °C dans l’obscurité, après quoi les cercles de vaseline sont retirés et les boîtes sont placées ouvertes dans une serre à une température de 15-18 °C avec brumisation périodique (trois fois par jour pendant 30 minutes).
Si l’infection a échoué, par exemple parce que le germe a pourri ou ne s’est pas développé, le tubercule peut être à nouveau testé à l’aide d’un autre germe;
— évaluation:
les germes sont soumis à un examen de dépistage de l’infection 28 jours après l’inoculation, à l’aide d’un stéréomicroscope avec un grossissement de x 10 à x 15 et d’un microscope optique.
Des réactions notées 4 ou 5, comme indiqué dans le tableau, sont observées sur le témoin positif sur au moins 80 % des tubercules. Au moins un tubercule présente une note de 5;
6) tous les tubercules sont évalués et obtiennent une note de résistance allant de 1 à 5, comme indiqué dans le tableau;
7) chaque variété testée est placée dans un groupe de résistance («hautement résistante», «résistante», «peu sensible» ou «extrêmement sensible»), en fonction de l’échelle de notes observée au sein de la population respective de tubercules ou de fragments comportant un œil testés:
i) une variété est considérée comme «hautement résistante» si tous les tubercules de tous les échantillons ont une note de 1;
ii) une variété est considérée comme «résistante» si tous les tubercules de tous les échantillons ont une note comprise entre 1 et 3;
iii) une variété est considérée comme «peu sensible» si un ou plusieurs tubercules obtiennent une note de 4 (si seul un tubercule obtient une note de 4, le test peut être répété, afin d’exclure toute impureté dans le lot variétal);
iv) une variété est considérée comme «extrêmement sensible» si au moins un tubercule d’un échantillon obtient une note de 5.
Notations standard pour les populations testées de pommes de terre
| Note standard | Groupe de résistance | Description de la résistance | Description
| 1 | R1 | Extrêmement résistante | Nécrose de défense précoce; pas de formation de sores visibles.
| 2 | R1 | Résistante | Nécrose de défense tardive; formation de sores partiellement visibles; sores immatures ou nécrotiques avant maturité.
| 3 | R2 | Peu résistante |
Nécrose de défense très tardive; un seul sore mature ou des champs de sores se sont développés mais sont complètement entourés d’une nécrose; jusqu’à cinq sores d’été non nécrotiques autorisés, nécrose claire dans d’autres zones du même tubercule. Pas de formation de galles ou de spores dormantes.
Pour choisir entre les groupes 3 et 4, il peut être nécessaire de préparer de fines lames de tissu infecté: s’il n’y a pas de spores dormantes, la note est de 3.
| 4 | S1 | Peu sensible |
Infections éparses; champs de sores non nécrotiques, peu nombreux; une nécrose tardive peut être présente sur d’autres sites d’infection sur le germe; le germe peut être légèrement malformé (épaissi). Des sporanges dormants (d’hiver) sont présents.
Pour choisir entre les groupes 3 et 4, il peut être nécessaire de préparer de fines lames de tissu infecté: si des spores dormantes sont présentes, la note est de 4.
| 5 | S2 | Extrêmement sensible | Champs d’infection denses, nombreux champs de sores et sores non nécrotiques matures, champs avec des sites d’infection non nécrotique denses, formation de galle prédominante.