L’annexe du règlement (CE) no 2870/2000 est modifiée comme suit:
1) Dans la table des matières, la ligne suivante est ajoutée:
«XI. Détermination de la teneur en 14C dans l’éthanol».
2) Au point 5 (Réactifs et matériaux) de la partie III.2 (Détermination des substances volatiles cogénérées: aldéhydes, alcools supérieurs, acétate d’éthyle et méthanol par chromatographie en phase gazeuse) du chapitre III, les points suivants sont insérés:
«5.13 bis Pour l’alcool éthylique d’origine agricole uniquement, éthanol absolu (CAS 64-17-5).»;
«5.14.1 bis Pour l’alcool éthylique d’origine agricole uniquement, la solution titrée A est préparée en introduisant à la pipette les réactifs avec des volumes réduits d’alcools supérieurs, afin de disposer de solutions titrées à des concentrations proches des limites légales pour l’alcool éthylique d’origine agricole.»;
«5.14.2 bis Pour l’alcool éthylique d’origine agricole uniquement, la solution titrée B est préparée en introduisant à la pipette un étalon interne adapté avec des volumes réduits, afin de disposer de solutions titrées à des concentrations proches des limites légales pour l’alcool éthylique d’origine agricole.».
3) Le chapitre XI suivant est ajouté:
«XI. DÉTERMINATION DE LA TENEUR EN 14C DANS L’ÉTHANOL
1. Introduction
La détermination de la teneur en 14C dans l’éthanol permet de faire la distinction entre l’alcool issu de combustibles fossiles (dit alcool de synthèse) et l’alcool issu de matières premières récentes (dit alcool de fermentation).
2. Définition
La teneur en 14C dans l’éthanol est considérée comme la teneur en 14C déterminée à l’aide de la méthode décrite ici ou de la méthode C décrite dans la norme EN 16640.
La teneur naturelle de l’atmosphère en 14C (la valeur de référence), qui est assimilée par les plantes vivantes, n’est pas une valeur constante. La valeur de référence est donc déterminée dans l’éthanol issu de matières premières qui proviennent de la dernière période de végétation. Cette valeur annuelle de référence est déterminée conformément à la norme EN 16640. Toutefois, une autre valeur de référence peut être acceptée lorsqu’elle est certifiée par un organisme accrédité.
3. Principe
La teneur en 14C des échantillons contenant de l’alcool avec au moins 85 %mas d’éthanol est déterminée directement par comptage à scintillation liquide.
4. Réactifs
4. 1. Scintillateur au toluène
5,0 g 2,5-diphényloxazole (PPO)
0,5 g p-bis [4-méthyle-5-phényloxazole (2)]-benzène (diméthyle-POPOP) dans un litre de toluène de qualité pour analyse
Des scintillateurs au toluène de cette composition disponibles dans le commerce et prêts à l’emploi peuvent également être utilisés.
4. 2. 14C étalon
14C n-hexadécane avec une activité d’environ 1 × 106 dpm/g (environ 1,67 × 106 cBq/g) et une précision garantie de l’activité déterminée de ± 2 % rel.
4. 3. Éthanol exempt de 14C
Alcool de synthèse issu de matières premières d’origine fossile avec au moins 85 %mas d’éthanol, pour déterminer le bruit de fond.
4. 4. Alcool issu de matières premières récentes qui proviennent de la dernière période de végétation, avec au moins 85 %mas d’éthanol comme solution de référence.
5. Appareillage
5. 1. Spectromètre à scintillation liquide multi-canaux avec processeur et standardisation externe automatique et affichage du rapport étalon externe/canal (configuration habituelle: trois canaux de mesure et deux canaux étalon externes).
5. 2. Tubes compteurs à faible teneur en potassium adaptés au spectromètre, munis de bouchons filetés sombres qui intègrent une protection intérieure en polyéthylène.
5. 3. Pipettes volumétriques 10 ml.
5. 4. Doseur automatique 10 ml.
5. 5. Ballon à fond rond et col rodé 250 ml.
5. 6. Appareillage de distillation de l’alcool avec chauffe-ballon, par exemple de type Micko.
5. 7. Seringue microlitre 50 μl.
5. 8. Entonnoir pour pycnomètre, pycnomètres, 25 et 50 ml. Il convient d’autoriser les appareillages équivalents, notamment de densimétrie électronique, en tant que solutions de substitution.
5. 9. Thermostat avec une stabilité de température de ± 0,01 °C.
6. Mode opératoire
6. 1. Réglage de l’appareillage
Le réglage de l’appareillage se fait conformément aux instructions du fabricant. Les conditions de mesure sont optimales lorsque la valeur E2/B, dite facteur de mérite, est maximale.
E = efficiency (efficacité)
B = background (bruit de fond)
Seuls deux canaux de mesure sont optimisés. Le troisième canal de mesure est laissé totalement ouvert pour des raisons de contrôle.
6. 2. Sélection des tubes compteurs
Les tubes compteurs sont, dans un plus grand nombre que ce qui sera nécessaire par la suite, chacun remplis de 10 ml d’éthanol de synthèse exempt de 14C et de 10 ml de scintillateur au toluène. Ces tubes sont chacun mesurés pendant au moins 4 cycles de 100 minutes. Les tubes dont le bruit de fond s’écarte de plus de ± 1 % rel. de la moyenne sont éliminés. Seuls des tubes neufs et provenant d’un même lot sont utilisés.
6. 3. Détermination du rapport étalon externe/canal (REEC)
Lors du réglage des canaux (voir le point 6.1), le REEC est déterminé à l’aide du programme de calcul approprié lors de la détermination du coefficient d’efficacité. L’étalon externe utilisé est le césium137, qui est déjà intégré dans l’appareillage par le fabricant.
6. 4. Préparation de l’échantillon
Les échantillons qui présentent une teneur en éthanol d’au moins 85 %mas, qui sont exempts d’impuretés et qui absorbent à des longueurs d’ondes inférieures à 450 nm peuvent être mesurés. Le faible résidu en aldéhydes et en esters n’a pas d’effet perturbateur. La teneur en alcool de l’échantillon est préalablement déterminée avec une approximation de 0,1 %.
7. Mesure des échantillons avec un étalon externe
7. 1. Les échantillons de faible absorbance décrits au point 6.4 qui présentent une valeur REEC d’environ 1,8 peuvent être mesurés par le REEC, qui constitue une mesure pour le coefficient d’efficacité.
7. 2. Mesure
Dans chaque tube compteur contrôlé (sélectionné) pour le bruit de fond, introduire à la pipette 10 ml d’un échantillon préparé conformément au point 6.4 puis ajouter 10 ml de scintillateur au toluène à l’aide d’un doseur automatique. Les échantillons dans les tubes sont homogénéisés par des mouvements de rotation; le liquide ne doit pas mouiller la protection intérieure en polyéthylène du bouchon fileté. Un tube contenant de l’éthanol fossile exempt de 14C est préparé de la même manière pour mesurer le bruit de fond. Afin de vérifier la valeur annuelle de 14C, un doublon d’éthanol récent provenant de la dernière période de végétation est préparé: le contenu d’un tube compteur est mélangé avec un étalon interne, voir le point 8.
Les échantillons de contrôle et les échantillons pour bruit de fond sont placés au début de la série de mesures, laquelle ne doit pas comprendre plus de 10 échantillons d’analyse. La durée totale de mesure par échantillon est d’au moins 2 × 100 minutes, les échantillons individuels étant mesurés par étapes partielles de 100 minutes afin de pouvoir détecter toute dérive ou autre perturbation de l’appareillage. (Un cycle correspond ainsi à un intervalle de mesure de 100 minutes par échantillon).
Les échantillons pour bruit de fond et les échantillons de contrôle doivent être renouvelés toutes les quatre semaines.
Pour les échantillons dont l’absorbance est plutôt faible (REEC d’environ 1,8), l’efficacité n’est que peu influencée par la modification de cette valeur. Lorsque cette modification ne dépasse pas ± 5 % rel., la même efficacité peut être attendue. Pour les échantillons dont l’absorbance est encore plus faible, par exemple pour les alcools dénaturés, l’efficacité peut être calculée par la courbe dite de correction d’absorbance. En cas d’indisponibilité d’un programme de calcul approprié, l’étalon interne est utilisé et permet d’obtenir un résultat univoque.
8. Mesures des échantillons avec un étalon interne hexadécane 14C
8. 1. Mode opératoire
Les échantillons de contrôle et les échantillons pour bruit de fond (éthanol récent et fossile) ainsi que les solutions inconnues sont chacun mesurés en doublon. Dans un tube non sélectionné, préparer un échantillon du doublon puis ajouter une quantité dosée avec précision (30 μl) d’hexadécane 14C en tant qu’étalon interne (activité ajoutée d’environ 26 269 dpm/gC soit approximativement 43 782 cBq/gC). Se référer au point 7.2 pour la préparation et le temps de mesure des autres échantillons. Toutefois, le temps de mesure pour les échantillons avec l’étalon interne peut être réduit à environ cinq minutes par un préréglage à 105 impulsions. Un doublon de chacun des échantillons pour bruit de fond et des échantillons de contrôle est utilisé par série de mesures; ceux-ci sont placés au début de la série de mesures.
8. 2. Manipulation de l’étalon interne et des tubes compteurs
Afin d’éviter les contaminations lors des mesures avec les étalons internes, ceux-ci sont stockés et manipulés à bonne distance de la zone où les échantillons d’analyse sont préparés et mesurés. Après la mesure, les tubes pour bruit de fond peuvent être réutilisés. Les bouchons filetés et les tubes contenant les étalons internes sont jetés.
9. Expression des résultats
9. 1. L’unité de mesure de l’activité d’une substance radioactive est le becquerel; 1 Bq = 1 désintégration/sec.
La radioactivité spécifique est exprimée en becquerel par rapport à 1 gramme de carbone = Bq/gC.
Afin d’obtenir des résultats plus pratiques, ceux-ci doivent être exprimés en centi-becquerel: cBq/gC.
Les désignations et les formules utilisées dans les publications, basées sur les dpm, peuvent également être utilisées. Afin d’obtenir la valeur correspondante en centi-becquerel, il suffit de multiplier la valeur en dpm par le facteur 100/60.
9. 2. Expression des résultats avec un étalon externe
cBqg C cpmpr – cpmNE ·1,918 · 100V · F · Z · 60
9. 3. Expression des résultats avec un étalon interne
cBqg C cpmpr – cpmNE · dpmIS ·1,918 · 100cpmIS – cpmpr · V · F · 60
9. 4. Abréviations
cpmprtaux de comptage moyen des échantillons pendant la durée totale de mesure
cpmNEtaux de comptage moyen du bruit de fond calculé de la même manière
cpmIStaux de comptage des échantillons avec un étalon interne
dpmISquantité d’étalon interne ajouté (radioactivité étalonnée dpm)
Vvolume des échantillons utilisés en ml
Fteneur en gramme d’alcool pur par ml correspondant à sa concentration
Zcoefficient d’efficacité correspondant à la valeur du REEC
1,918grammes d’alcool/1 g de carbone
10. Fiabilité de la méthode
10. 1. Répétabilité (r)
r = 0,632 cBq/g C; S(r) = ± 0,223 cBq/g C
10. 2. Reproductibilité (R)
R = 0,821 cBq/g C; S(R) = ± 0,290 cBq/g C».