Champ d’application
La présente annexe s’applique aux dispositifs destinés à la détection ou à la quantification des marqueurs d’infection par le cytomégalovirus (CMV).
Le tableau 1 s’applique aux tests de première ligne pour les anticorps totaux dirigés contre le CMV (anti-CMV totaux) et les anticorps IgG dirigés contre le CMV (IgG anti-CMV).
Le tableau 2 s’applique aux dispositifs NAT qualitatifs et quantitatifs pour l’ADN du CMV.
Tableau 1. Tests de première ligne: anti-CMV totaux et IgG anti-CMV
| Caractéristique de performance | Échantillons | Nombre d’échantillons, caractéristiques, utilisation | Critères d’acceptation
| Sensibilité diagnostique | Échantillons positifs |
≥ 400
comprenant des échantillons représentant une infection récente ou passée par le CMV,
échantillons présentant des titres faiblement positifs et fortement positifs
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Sensibilité d’au moins 99 % pour pouvoir confirmer une infection passée;
la sensibilité globale comprenant une récente infection doit être au moins équivalente au dispositif comparateur
| Panels de séroconversion | À tester en fonction des disponibilités | La sensibilité diagnostique lors de la séroconversion doit représenter l’état de la technique
| Sensibilité analytique | Normes |
Standard international de l’OMS concernant les IgG anti-CMV (code PEI 136616/17)
En cas de déterminations des titres et d’informations quantitatives
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| Spécificité diagnostique | Échantillons négatifs | ≥ 400 échantillons négatifs au CMV provenant de donneurs non sélectionnés, par rapport à un autre test CMV. | ≥ 99 %
| Patients hospitalisés | ≥ 200 | Les limitations potentielles quant à la spécificité doivent être identifiées le cas échéant
| Réactivité croisée | Échantillons avec réaction croisée potentielle |
≥ 100 au total
(par exemple, FR+, virus apparentés ou autres agents infectieux, femmes enceintes, etc.)
Tableau 2. Dispositifs NAT qualitatifs et quantitatifs pour l’ADN du CMV
1. En ce qui concerne les dispositifs d’amplification d’une séquence cible, un contrôle de fonctionnalité pour chaque échantillon (contrôle interne) représente l’état de la technique. Ce contrôle est opéré si possible tout au long du processus: extraction, amplification/hybridation, détection.
2. La détection du génotype et/ou du sous-type doit être démontrée par une validation appropriée de la conception de l’amorce ou de la sonde et doit aussi être validée en testant des échantillons de génotypes caractérisés.
3. La réaction croisée potentielle de séquences d’un acide nucléique non cible doit être analysée par une validation appropriée de la conception de l’amorce ou de la sonde et doit aussi être validée en testant des échantillons sélectionnés.
4. Les résultats des dispositifs NAT quantitatifs doivent suivre les normes internationales ou les matériaux de référence étalonnés, en fonction des disponibilités, et sont exprimés en unités internationales utilisées dans le domaine d’application en question.
| Caractéristique de performance | Échantillons | Nombre d’échantillons, caractéristiques, utilisation | Critères d’acceptation
| Sensibilité analytique | Premier standard international de l’OMS concernant l’ADN du CMV (09/162; 5 000 000 UI/flacon) (ou matériaux de référence étalonnés) |
La sensibilité et la limite de détection des tests NAT doivent être validées par des séries de dilution de matériaux de référence, en testant les réplicats (au minimum 24) à différentes concentrations d’analyte, y compris celles avec une transition de résultats positifs à des résultats négatifs avec le dispositif NAT en question.
La limite de détection doit être exprimée en tant que valeur limite positive à 95 % (IU/ml) après des analyses statistiques (par exemple, des analyses de probabilité).
NAT quantitatif: définition de limite de quantification inférieure et supérieure, fidélité, exactitude,
champ de mesure «linéaire», «champ dynamique».
Reproductibilité aux différents niveaux de concentration.
| Conformément à l’état de la technique
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Sensibilité diagnostique
Sensibilité des souches de CMV
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Échantillons de patients déterminés comme positifs à l’ADN du CMV par un dispositif comparateur
Des séries de dilution de cultures cellulaires positives au CMV peuvent servir de substituts potentiels
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NAT qualitatif: ≥ 100
NAT quantitatif: ≥ 100
séries de dilution pour démontrer l’efficacité de la quantification
| Conformément à l’état de la technique
| Spécificité diagnostique | Échantillons de donneurs de sang |
NAT qualitatif: ≥ 500
NAT quantitatif: ≥ 100
| Conformément à l’état de la technique
| Réactivité croisée | Échantillons avec réaction croisée potentielle |
≥ 20 échantillons au total
Comprenant des échantillons humains positifs à des herpèsvirus humains apparentés, par exemple, VEB, HHV-6, VZV
Des cultures cellulaires positives à un herpèsvirus peuvent servir de substituts potentiels
| Conformément à l’état de la technique
| Effets reportés |
Fortement positifs à l’ADN du CMV;
négatifs à l’ADN du CMV
| Au moins cinq séries doivent être réalisées lors des études de robustesse, en alternant des échantillons fortement positifs et négatifs. Les titres viraux des échantillons fortement positifs doivent être représentatifs des titres viraux élevés apparaissant naturellement. | Conformément à l’état de la technique
| Taux d’échec global | Faiblement positifs à l’ADN du CMV | ≥ 100 échantillons faiblement positifs à l’ADN du CMV doivent être testés. Ceux-ci doivent contenir une concentration en virus équivalente à trois fois la concentration en virus limite positive à 95 %. | ≥ 99 % positifs