Champ d’application
La présente annexe s’applique aux dispositifs destinés à la détection ou à la quantification des marqueurs d’infection par Trypanosoma cruzi (T. cruzi).
Le tableau 1 s’applique aux tests de première ligne pour les anticorps dirigés contre T. cruzi (anti-T. cruzi).
Le tableau 2 s’applique aux tests de confirmation et aux tests complémentaires anti-T. cruzi.
Le tableau 3 s’applique aux dispositifs NAT qualitatifs et quantitatifs pour l’ADN T. cruzi.
Tableau 1. Tests de première ligne: anti-T. cruzi
| Caractéristique de performance | Échantillons | Nombre d’échantillons, caractéristiques, utilisation | Critères d’acceptation
| Sensibilité diagnostique | Échantillons positifs |
≥ 400 échantillons positifs, comprenant des échantillons fortement positifs confirmés par au moins deux tests sérologiques différents pour différents anticorps dirigés contre T. cruzi.
Sur ces 400 échantillons, ≥ 25 échantillons positifs parasites, confirmés par détection directe.
| Sensibilité globale d’au moins 99,5 %
| Panels de séroconversion | À définir en fonction des disponibilités | La sensibilité diagnostique lors de la séroconversion doit représenter l’état de la technique
| Sensibilité analytique | Normes |
Standards internationaux de l’OMS
Code NIBSC: 09/186
Code NIBSC: 09/188
|
| Spécificité diagnostique | Donneurs non sélectionnés (y compris donneurs effectuant leur premier don) | ≥ 5 000 | ≥ 99,5 %
| Patients hospitalisés | ≥ 200 | Les limitations potentielles quant à la spécificité doivent être identifiées le cas échéant
| Réactivité croisée | Échantillons avec réaction croisée potentielle |
≥ 100 au total
comprenant les échantillons suivants: positifs aux anti-Toxoplasma gondii; au moins 5 échantillons positifs aux anti-Leishmania; FR+; agent microbiens apparentés ou autres agents infectieux; patients atteints de LED; patients positifs aux anticorps antiphospholipides; femmes enceintes, etc.
Tableau 2. Tests de confirmation et tests complémentaires: anti-T. cruzi
| Caractéristique de performance | Échantillons | Nombre d’échantillons, caractéristiques, utilisation | Critères d’acceptation
| Sensibilité diagnostique | Échantillons positifs |
≥ 300 échantillons positifs, comprenant des échantillons fortement positifs confirmés par au moins deux tests sérologiques différents pour différents anticorps dirigés contre T. cruzi.
Sur ces 300 échantillons, ≥ 25 échantillons positifs parasites, confirmés par détection directe.
| ≥ 99 % identifiés comme «positifs confirmés» ou «indéterminés»
| Panels de séroconversion | En fonction des disponibilités | La sensibilité diagnostique lors de la séroconversion doit représenter l’état de la technique, le cas échéant.
| Sensibilité analytique | Normes |
Standards internationaux de l’OMS
Code NIBSC: 09/186
Code NIBSC: 09/188
|
| Sensibilité diagnostique | Échantillons négatifs | ≥ 200 | ≥ 99 %
| Échantillons cliniques: | ≥ 200 | Les limitations potentielles quant à la spécificité doivent être identifiées le cas échéant
| Réactivité croisée | Échantillons avec réaction croisée potentielle | ≥ 50 au total (y compris des échantillons de femmes enceintes et des échantillons ayant donné des résultats indéterminés dans d’autres tests de confirmation)
Tableau 3. Dispositifs NAT pour ADN de T. cruzi
1. En ce qui concerne les dispositifs d’amplification d’une séquence cible, un contrôle de fonctionnalité pour chaque échantillon (contrôle interne) représente l’état de la technique. Ce contrôle est opéré si possible tout au long du processus: extraction, amplification/hybridation, détection.
2. La détection du génotype et/ou du sous-type doit être démontrée par une validation appropriée de la conception de l’amorce ou de la sonde et doit aussi être validée en testant des échantillons de génotypes caractérisés.
3. La réaction croisée potentielle de séquences d’un acide nucléique non cible doit être analysée par une validation appropriée de la conception de l’amorce ou de la sonde et doit aussi être validée en testant des échantillons sélectionnés.
4. Les résultats des dispositifs NAT quantitatifs doivent suivre les normes internationales ou les matériaux de référence étalonnés, en fonction des disponibilités, et sont exprimés en unités internationales utilisées dans le domaine d’application en question.
| Caractéristique de performance | Échantillons | Nombre d’échantillons, caractéristiques, utilisation | Critères d’acceptation
| Sensibilité analytique | Préparation de référence caractérisée en interne (tant que les matériaux de référence internationaux ne sont pas disponibles) |
La sensibilité et la limite de détection des tests NAT doivent être validées par des séries de dilution de matériaux de référence, en testant les réplicats (au minimum 24) à différentes concentrations d’analyte, y compris celles avec une transition de résultats positifs à des résultats négatifs avec le dispositif NAT en question.
La limite de détection doit être exprimée en tant que valeur limite positive à 95 % (IU/ml) après des analyses statistiques (par exemple, des analyses de probabilité).
| Conformément à l’état de la technique
| Sensibilité diagnostique: différentes souches/isolats de T. cruzi | Échantillons de patients provenant de différentes régions déterminés comme positifs à l’ADN de T. cruzipar par un dispositif comparateur; variantes séquentielles |
≥ 100
Des séries de dilution de cultures (isolats) cellulaires positives à T. cruzi ou des matériaux positifs à T. cruzi provenant de modèles animaux peuvent servir de substituts potentiels.
| Conformément à l’état de la technique
| Spécificité diagnostique | Échantillons négatifs | ≥ 100 | Conformément à l’état de la technique
| Réactivité croisée | Échantillons avec réaction croisée potentielle | ≥ 10 échantillons humains positifs à d’autres parasites, par exemple, espèces Plasmodium, Trypanosoma brucei. Des cultures cellulaires positives peuvent servir de substituts potentiels. | Conformément à l’état de la technique
| Effets reportés | | Au moins cinq séries doivent être réalisées lors des études de robustesse, en alternant des échantillons fortement positifs et négatifs. Les titres T. cruzi des échantillons fortement positifs doivent être représentatifs des titres T. cruzi élevés apparaissant naturellement. | Conformément à l’état de la technique
| Taux d’échec global | | ≥ 100 échantillons faiblement positifs à l’ADN de T. cruzi doivent être testés. Ceux-ci doivent contenir une concentration en T. cruzi équivalente à trois fois la concentration limite positive à 95 % en T. cruzi. | ≥ 99 % positifs